Notícia - O novo trabalho, relatado on-line na edição de 28 de fevereiro da Nature , modifica a enzima Cas9, criando pelo menos quatro vezes mais sites de encaminhamento potenciais . Em teoria, isso poderia permitir que os pesquisadores, por exemplo, paralizassem ou substituíssem muitas partes de genes associados à doença humana que o CRISPR atualmente não pode tocar. O laboratório de Liu começou por engenharia de uma grande variedade de spCas9s ligeiramente alterados. O grupo então selecionado para aqueles que poderiam usar um alcance mais amplo das 64 possíveis almofadas de pouso de três bases - tecnicamente referidas como motivos adjacentes ao protospacer ou PAMs. Eles apelidaram suas novas enzimas xCas9s, e a melhor trabalha com NGN, uma seqüência que ocorre em um quarto do genoma. Liu esperava que, em troca de ganhar a capacidade de se conectar a mais lugares, xCas9 pagaria uma penalidade: mais dos cortes potencialmente perigosos fora do alvo que dizem respeito a pesquisadores na esperança de desencadear CRISPR em medicina. Afinal, o pensamento convencional afirma que Cas9, naturalmente parte de uma estratégia imunitária bacteriana, evoluiu para ser tão promíscuo em sua ligação ao DNA como poderia ser sem comprometer a especificidade.
 21/05/18 18:07:43

O novo trabalho, relatado on-line na edição de 28 de fevereiro da Nature , modifica a enzima Cas9, criando pelo menos quatro vezes mais sites de encaminhamento potenciais . Em teoria, isso poderia permitir que os pesquisadores, por exemplo, paralizassem ou substituíssem muitas partes de genes associados à doença humana que o CRISPR atualmente não pode tocar. O laboratório de Liu começou por engenharia de uma grande variedade de spCas9s ligeiramente alterados. O grupo então selecionado para aqueles que poderiam usar um alcance mais amplo das 64 possíveis almofadas de pouso de três bases - tecnicamente referidas como motivos adjacentes ao protospacer ou PAMs. Eles apelidaram suas novas enzimas xCas9s, e a melhor trabalha com NGN, uma seqüência que ocorre em um quarto do genoma. Liu esperava que, em troca de ganhar a capacidade de se conectar a mais lugares, xCas9 pagaria uma penalidade: mais dos cortes potencialmente perigosos fora do alvo que dizem respeito a pesquisadores na esperança de desencadear CRISPR em medicina. Afinal, o pensamento convencional afirma que Cas9, naturalmente parte de uma estratégia imunitária bacteriana, evoluiu para ser tão promíscuo em sua ligação ao DNA como poderia ser sem comprometer a especificidade.


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Você não saberia disso com a emoção gerada pelo método revolucionário de edição do genoma conhecido como CRISPR, mas, como praticado agora, está longe de ser perfeito. Seus componentes padrão podem encontrar e cortar DNA em apenas uma fração limitada do genoma, e suas tesouras moleculares são bambas, levando a mutações "fora do alvo". Muitos grupos estão tentando fazer melhor, e agora, uma equipe liderada pelo químico David Liu, da Universidade de Harvard, criou uma versão do CRISPR que potencialmente é mais habilidosa e mais precisa.

"Este é um trabalho muito impressionante e importante", diz o pioneiro da CRISPR, Erik Sontheimer, da Faculdade de Medicina da Universidade de Massachusetts em Worcester.

O CRISPR vem em muitos sabores, mas todos dependem de uma molécula guia composta de RNA para transportar uma enzima de corte de DNA - a mais usada é conhecida pela taquigrafia Cas9 - a um trecho específico do genoma. Este complexo, no entanto, abriga as almofadas de pouso de DNA que possuem características moleculares específicas. A enzima no kit de ferramentas CRISPR padrão, chamado spCas9 para sua fonte natural, a bactéria Streptococcus pyogenes , só pode pousar em segmentos de genoma que têm em uma extremidade um trio específico de três bases: N, onde N é uma das quatro bases do DNA, seguiu por dois guanines (Gs). Apenas cerca de um décimo sexto do genoma humano de 3,2 bilhões de bases tem a seqüência certa. "Essa foi uma limitação real", diz Liu.